對肝細(xì)胞癌的治療方法包括手術(shù)療法、肝動(dòng)脈栓塞術(shù)（TAE）、射頻消融（RFA）等局部療法，以及使用細(xì)胞毒性藥物的化學(xué)療法。肝癌治療中最大的問題在于，即使早期發(fā)現(xiàn)局部根治后復(fù)發(fā)率仍然很高，單病灶切除術(shù)后的3年復(fù)發(fā)率高達(dá)72%。臨床報(bào)告顯示TAE術(shù)后實(shí)施RFA的臨床試驗(yàn)中，1、3、5年的無復(fù)發(fā)率分別為64.5%、40.1%、18.0%。報(bào)告中治療方法TAE中包括使用化學(xué)藥物的TACE治療。經(jīng)過TAE后RFA的病例中，長期仍保持高復(fù)發(fā)率，從而復(fù)發(fā)時(shí)仍需要同樣的治療，反復(fù)治療后的病例都顯示了長期預(yù)后惡化的傾向。

肝動(dòng)脈栓塞術(shù)（TAE）是用導(dǎo)管經(jīng)動(dòng)脈接近病變處，注入血管栓塞物質(zhì)來治療的方法。在狹義上講是對腫瘤“段軍糧”的方法。在廣義上講是通過栓塞物質(zhì)調(diào)整血流走向，提高局部病灶的藥物分布以加強(qiáng)療效的方法。
為了進(jìn)一步提高該療法的療效本臨床試驗(yàn)用DDS（Drug & Dendritic cell Delivery System）將抗癌藥物、樹突狀細(xì)胞緩慢釋放到治療目標(biāo)，以促進(jìn)臨床研究。

本試驗(yàn)基于腫瘤免疫循環(huán)的基礎(chǔ)，以下說明。經(jīng)局部治療（RFA）后癌細(xì)胞陷入程序死亡狀態(tài)，激活抗原提示細(xì)胞即樹突狀細(xì)胞（dendritic cells）并使之成熟，DC游走至淋巴結(jié)內(nèi)，在此處開始誘導(dǎo)激活T細(xì)胞。被激活的T細(xì)胞通過血管浸潤到腫瘤組織內(nèi)，開始攻擊癌細(xì)胞。我們設(shè)想向進(jìn)入程序死亡的癌組織追加注射樹突狀細(xì)胞后，可能會(huì)誘發(fā)更強(qiáng)烈的抗腫瘤免疫反應(yīng)。期待單一細(xì)胞可以組織肝癌的復(fù)發(fā)。

多項(xiàng)臨床研究的結(jié)果匯總。左側(cè)圖表顯示的是副作用，與沒有投放樹突狀細(xì)胞的TAE比較，投放各種樹突狀細(xì)胞引起發(fā)熱，發(fā)熱的持續(xù)時(shí)間卻沒有延長，沒有發(fā)生NCI-CTC3級以上有害事件。右側(cè)圖表顯示的是無復(fù)發(fā)生存率，與TAE比較，投放了OK432刺激的樹突狀細(xì)胞的明顯抑制了復(fù)發(fā)。說明使用OK432刺激的樹突狀細(xì)胞激活了腫瘤免疫應(yīng)答，抑制了肝細(xì)胞癌的復(fù)發(fā)。該臨床研究的成果顯示，TAE治療的癌細(xì)胞程序死亡可作為腫瘤免疫循環(huán)的起動(dòng)劑，再投放的樹突狀細(xì)胞加速了免疫反應(yīng)，從結(jié)果上抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖。

下面，我們比較了TAE+RFA治療和TAE+RFA+OK432治療的案例。治療組合對照組病例中，在臨床因素、慢性肝病的發(fā)展程度、腫瘤病期、腫瘤數(shù)量、最大腫瘤直徑、AFP數(shù)據(jù)上沒有有效差異。

我們論證了樹突狀細(xì)胞治療抑制肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的作用機(jī)理。圖表上部分顯示使用ELISPOT測量CD8+T細(xì)胞對癌抗原肽的反應(yīng)程度。使用OK432刺激樹突狀細(xì)胞治療后，誘導(dǎo)了部分抗原的反應(yīng)。從DTH皮內(nèi)反應(yīng)觀察，CD4+T細(xì)胞被誘導(dǎo)。圖表下部分顯示了使用BioPlex測量的主要細(xì)胞因子、驅(qū)動(dòng)因子的觀察結(jié)果。

我們觀察到IL-９、IL-15、TNF-α、Eotaxin、MIP-1β等Ⅰ型輔助T細(xì)胞的細(xì)胞因子與樹突狀細(xì)胞的有無反應(yīng)是不同的。也就是說，在沒有投放樹突狀細(xì)胞時(shí)（白色）細(xì)胞因子反應(yīng)不良，投放OK432樹突狀細(xì)胞（紅色）后細(xì)胞因子開始增加。相對Ⅰ型，與Ⅱ型輔助T細(xì)胞相關(guān)的IL-4、IL-10因子在投放前后沒有變化。此外，接受治療后，骨髓由來的抗腫瘤免疫細(xì)胞（MDSC）活性有下降傾向。從這些結(jié)果推斷，OK432誘導(dǎo)了Ⅰ型輔助T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，同時(shí)也減輕了免疫抑制壓力，發(fā)揮了抗腫瘤效果。
以上的研究結(jié)果顯示，從末梢血液誘導(dǎo)培養(yǎng)的樹突狀細(xì)胞投入肝癌的局部治療方法，能夠增強(qiáng)T細(xì)胞介入的全身性腫瘤免疫治療效果，可以作為抑制腫瘤復(fù)發(fā)的治療方法。

常用的免疫細(xì)胞療法中，很難增殖免疫功能低下患者的淋巴細(xì)胞（LAK），不容易培養(yǎng)足夠的數(shù)量。而且癌細(xì)胞本身具備的免疫逃逸機(jī)制使投放LAK效果不佳，也是個(gè)臨床運(yùn)用的難題。在此背景下，我們期待利用組織工程學(xué)的方法嵌合抗原受體，改變基因的T細(xì)胞療法能夠解決這些問題。

①構(gòu)造
在CAR的基本構(gòu)造中，由1）識別抗體中的靶點(diǎn)，特異性結(jié)合部位（scFv）；2）細(xì)胞膜貫通部位；3）細(xì)胞活化部位（CD３ζ鎖鏈）3個(gè)部分構(gòu)成了嵌合蛋白（第1代）。為了增加T細(xì)胞的活性，現(xiàn)在已經(jīng)有了第2代、第3代的改良，CD28、41BB。

※1 嵌合蛋白：基因轉(zhuǎn)換技術(shù)可結(jié)合不同蛋白

②CAR的特點(diǎn)
改變CAR的標(biāo)的結(jié)合部位（scFv），可以產(chǎn)生針對各種靶點(diǎn)的具有特異性和攻擊性的效應(yīng)T細(xì)胞（CTL）。此外，只利用抗體標(biāo)的進(jìn)行識別，不用考慮癌細(xì)胞的MHC識別路徑，與通常使用的必須通過MHC識別的CTL相比，沒有MHC表達(dá)的癌細(xì)胞也可以被識別。也就是說，CAR的識別能力比通常免疫細(xì)胞治療的CTL的特異性更優(yōu)越，可以期待更高的免疫聚集性（發(fā)現(xiàn)標(biāo)的開始攻擊的結(jié)合能力）。

③CAR-T細(xì)胞療法
從患者末梢采集血液中的單核細(xì)胞，在抗CD3抗體和IL-2環(huán)境中培養(yǎng)后，對激活了的T細(xì)胞使用病毒載體，導(dǎo)入CAR基因（DNA）。導(dǎo)入基因后，再培養(yǎng)數(shù)日。
※２ 抗CD3抗體和IL-2是激活、增殖T細(xì)胞的必須因子。

【國外(美國)】
針對白血病和淋巴瘤使用CD19特異的CAR療法，針對神經(jīng)母細(xì)胞瘤使用GD2特異的CAR療法，臨床試驗(yàn)進(jìn)展最迅速，有部分文獻(xiàn)報(bào)告了明顯的治療效果。

利用CAR-T細(xì)胞治療的問題，主要有以下3點(diǎn)。
① 期待較高的治療效果的同時(shí)，具有容易誘發(fā)嚴(yán)重的自體免疫疾?。?xì)胞因子釋放綜合征等）的風(fēng)險(xiǎn)（有死亡案例）。
② 可作為CAR的標(biāo)的抗原種類多，但是細(xì)胞內(nèi)的抗原，很難被CAR識別。
③ CAR的標(biāo)的抗原，因癌種而不同，需要分別鑒別癌種（患者）的個(gè)體特異性scFv（識別標(biāo)的的部位）

滉志會(huì)與大阪大學(xué)一起，正在研究開發(fā)制作針對“血管內(nèi)皮增殖因子受體VEGFR2的CAR識別CTL（CAR-T）。

【特點(diǎn)】
用EP法將flk１特異的結(jié)合部位（scFv）+細(xì)胞膜貫通部位+細(xì)胞活化擔(dān)當(dāng)部位（CD28及CD3ζ）CAR（第2代）的mRNA導(dǎo)入T細(xì)胞。
※3 EP法：電刺激細(xì)胞后細(xì)胞短時(shí)間內(nèi)開口，從開口處將mRNA、蛋白質(zhì)等導(dǎo)入細(xì)胞的技術(shù)。

人類免疫系統(tǒng)不僅僅清除入侵機(jī)體的細(xì)菌和毒素，也是腫瘤能機(jī)體內(nèi)發(fā)生疾病時(shí)的自然防御系統(tǒng)。這個(gè)系統(tǒng)也稱為“腫瘤免疫循環(huán)”（Chen and Mallman, 2013)⁽¹⁾。目前的研究表明，人類免疫細(xì)胞是按照以下過程清除體內(nèi)癌細(xì)胞的。

1. 發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞貪食變異了的抗原，并識別它。
2. 樹突狀細(xì)胞向T細(xì)胞遞程已經(jīng)識別了的抗原，誘導(dǎo)效應(yīng)性T細(xì)胞（CTL）的活性。
3. 激活的CTL浸潤到腫瘤微環(huán)境。
4. CTL識別腫瘤細(xì)胞后與其結(jié)合。
5. 結(jié)合了癌細(xì)胞的CTL釋放細(xì)胞傷害物質(zhì)（穿孔素、分解酶等），導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡（程序化死亡）。
6. 凋亡的癌細(xì)胞釋放出變異抗原和相關(guān)抗原（TAA）。這些被釋放的抗原再被樹突狀細(xì)胞識別，開始下一次免疫循環(huán)（1~6），周而復(fù)始激活免疫。

在腫瘤免疫虛幻中，增強(qiáng)并活化CTL的免疫細(xì)胞療法，與解除阻礙該免疫循環(huán)的免疫檢查點(diǎn)抑制劑聯(lián)合使用，可期待治療效果。

近年來，在腫瘤治療領(lǐng)域免疫細(xì)胞療法和免疫檢查點(diǎn)抑制劑得到關(guān)注，細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）的激活和免疫抑制因子的控制都是必要的。一方面，免疫檢查點(diǎn)抑制劑解除免疫抑制后間接誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，其他藥物治療無效的患者用該藥有效，但是受眾率有限。比如Opdivo治療非小細(xì)胞肺癌受益者只有2成^(3)(4)(5)。為了得到更好的免疫應(yīng)答，有必要考慮在免疫增強(qiáng)和抑制解除方面同時(shí)著手。我們一方面期待這種聯(lián)合免疫療法能為患者帶來福祉，但是其安全性至今沒有得到充分的評估和驗(yàn)證。因此，治療開始前為希望治療的患者提供特定的標(biāo)志物預(yù)判，治療開始后盡早能評測治療效果，以及確定治療時(shí)間都需要由切實(shí)可行的指標(biāo)來明確，雖然目前有很多研究正在這方面努力，但是仍然沒有找到明確的標(biāo)志物。關(guān)于Opdivo的安全性，一方面沒有化療的副作用強(qiáng)烈，另一方面卻有嚴(yán)重的副作用出現(xiàn)，使用Opdivo時(shí)，必須有緊急情況的應(yīng)對方案，以及完整的管理體系⁽⁶⁾。實(shí)際上，已經(jīng)有過使用免疫檢查點(diǎn)抑制劑后再使用免疫細(xì)胞治療的死亡案例，雖然沒有證據(jù)顯示他們有明確的相關(guān)性，但是日本勞動(dòng)厚生省已經(jīng)發(fā)文（平縣成28年7月28日）要求醫(yī)療機(jī)構(gòu)引起重視，慎用聯(lián)合療法。
在這樣的背景下，為了確立安全且更有效的治療方法，實(shí)現(xiàn)普及，本研究將科學(xué)地評估免疫細(xì)胞療法聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑為患者帶來的好處，在腫瘤治療方面，這非常重要。